三种布氏杆菌病病原检测方法敏感性比较

一、目的

在布氏杆菌病（以下简称布病）的净化和防控中需要做日常检测，而实验室负责检测的技术老师对新方法总有诸多疑问。在市售的ELISA试剂盒中人们常怀疑其是否真实可靠；而按检验规程用虎红平板试验和试管凝结法，则耗时且敏感性差，不易判断等。为此，我们实验室进行布病的三种检测方法敏感性比较，以便为他人选择何种方法用于检验提供帮助。

二、材料与方法

2.1  材料：

2.1.1  莱普生布病竞争抗体检测ELISA试剂盒  （批号：TE190701-1）

2.1.2  布鲁氏菌病虎红平板凝集抗原；购自中国兽医药品监察所，批号：20190305。

2.1.3  布鲁氏菌病试管凝集抗原：购自中国兽医药品监察所，批号：20180607。

2.2  样本选择

2.2.1 样本选择 ：河南省某市动物疫病预防控制中心提供牛、羊血清各90份，共计180份血清样本。先将所有样本进行虎红和ELISA试剂盒检测，将其中疑似阳性及阳性样本再进行试管凝集检测。

2.2.2  本试验过程的操作和试验结果的录入分别由不同人员进行，对试验结果进行整理与统计学分析，获得临床研究结果；保证研究方案的所有内容都得到严格遵守和填写研究资料的正确，防止实验数据在被记录时发生错误，保证其完整性和准确性。

三、实验结果分析

3.1  试剂盒检测结果分析：

实验室临床选择的样本有180份，均采用洛阳莱普生公司生产的布病竞争ELISA检测试剂盒进行测定，测定的结果见下表1：

表一 莱普生布病竞争试剂盒检测结果

注：标黄的是检测结果为阳性的样本。

由上表结果可知，所检所用羊血清均为阴性，牛血清中3、5、7-9、11、13-21、23-25、27、29、36、49和81，共计23份血清均为检测阳性结果。

2、虎红平板检测结果如下：

图1：牛血液样本检测结果

图2：羊血液样本检测结果

由上述图1和图2可知，所有羊血清检测结果均为阴性，牛血清中3、5、8、14-16、19和24，共计8份血清均为检测阳性样本。

3、布病试管凝集检测结果：

将上述两种方法检测结果为阳性的样本均进行试管凝集检测，共检测23份血清样本，血清分别为3、5、7-9、11、13-21、23-25、27、29、36、49和81。所有血清安照从小到大的顺序进行重新编号，编号为A1-A23。本次检测共检出阳性样本4份，检测结果见下图3：

图3：试管凝集法检测结果

由以上图片可知，布病试管凝集方法检出牛血清中3、5、14及15这4份样本为阳性样本，其余样本均为阴性样本。整体结果分析见表2。

表2：三种方法的结果比较表

四、分析与小结

通过以上3种方法检出结果，可以明显看出；在给定的180份牛、羊样本中，布病试剂盒的阳性检出率为12.78%，虎红平板的则为4.44%，而试管凝集所做样本均是以上两种方法检出的阳性样本进行检测，故该方法的阳性率更低，粗略计算仅为2.22%。因此，针对所送检的180份血清样本，阳性检出率为：布病试剂盒>虎红平板>试管凝集。

由于虎红平板和试管凝集均是由人主观察判读结果，故该方法与操作人员是否有相关经历经验、操作是否熟练有很大的关联，重复性相对较差。而试剂盒检测判断是依靠酶标仪进行读值判定，因此，该方法重复性会更好。且就方法学来说，本来试剂盒的敏感性就高于虎红平板，虎红平板敏感性高于试管凝集。希望搞检测的人员可根据需要选择合适的方法。

附件：莱普生布病竞争ELISA试剂盒原始数据